Karbapeneemi resistentsusgeen (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP)
Toote nimi
HWTS-OT045 karbapeneemi resistentsusgeeni (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP) tuvastamise komplekt (fluorestsents-PCR)
Epidemioloogia
Karbapeneemid on atüüpilised β-laktaamantibiootikumid, millel on kõige laiem antibakteriaalne spekter ja tugevam antibakteriaalne toime. Tänu oma stabiilsusele β-laktamaaside suhtes ja madalale toksilisusele on sellest saanud üks olulisemaid antibakteriaalseid ravimeid raskete bakteriaalsete infektsioonide ravis. Karbapeneemid on väga stabiilsed plasmiidvahendatud laia spektriga β-laktamaaside (ESBL), kromosoomide ja plasmiidvahendatud tsefalosporinaaside (AmpC ensüümide) suhtes.
Kanal
| PCR-segu 1 | PCR-segu 2 | |
| FAM | IMP | VIM |
| VIC/HEX | Sisekontroll | Sisekontroll |
| CY5 | NDM | KPC |
| ROX | OXA48
| OXA23 |
Tehnilised parameetrid
| Ladustamine | ≤-18 ℃ |
| Säilivusaeg | 12 kuud |
| Proovi tüüp | Röga, puhtad kolooniad, rektaalkaape |
| Ct | ≤36 |
| CV | ≤5,0% |
| LoD | 103CFU/ml |
| Spetsiifilisus | a) Komplekt tuvastab ettevõtte standardiseeritud negatiivsed võrdlusained ja tulemused vastavad vastavate võrdlusainete nõuetele. b) Ristreaktiivsuse testi tulemused näitavad, et sellel komplektil puudub ristreaktsioon teiste hingamisteede patogeenidega, näiteks Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Staphylococcus aureus, Klebsiella oxytoca, Haemophilus influenzae, Acinetobacter junii, Acinetobacter haemolyticus, Legionella pneumophila, Escherichia coli, Pseudomonas fluorescens, Candida albicans, Chlamydia pneumoniae, hingamisteede adenoviirus, Enterococcus või proovidega, mis sisaldavad teisi ravimiresistentseid geene CTX, mecA, SME, SHV, TEM jne. c) Häiretevastane toime: Häirete testiks valiti mutsiin, minotsükliin, gentamütsiin, klindamütsiin, imipeneem, tsefoperasoon, meropeneem, tsiprofloksatsiinvesinikkloriid, levofloksatsiin, klavulaanhape ja roksitromütsiin ning tulemused näitavad, et ülalmainitud häirivad ained ei avalda karbapeneemi resistentsusgeenide KPC, NDM, OXA48, OXA23, VIM ja IMP tuvastamisel häirivat reaktsiooni. |
| Kohaldatavad instrumendid | Applied Biosystems 7500 reaalajas PCR-süsteemid QuantStudio®5 reaalajas PCR-süsteemid SLAN-96P reaalajas PCR-süsteemid (Hongshi Medical Technology Co., Ltd.) LightCycler®480 reaalaja PCR-süsteem LineGene 9600 Plus reaalajas PCR-i tuvastussüsteem (FQD-96A，HangzhouBiotehnoloogia) MA-6000 reaalajas kvantitatiivne termotsükler (Suzhou Molarray Co., Ltd.) BioRad CFX96 reaalajas PCR-süsteem BioRad CFX Opus 96 reaalajas PCR-süsteem |
Töövoog
Variant 1.
Soovitatav ekstraheerimisreaktiiv: Macro & Micro-Test General DNA/RNA komplekt (HWTS-301)9-50, HWTS-3019-32, HWTS-3019-48, HWTS-3019-96) (mida saab kasutada koos Macro & Micro-Test automaatse nukleiinhappe ekstraktoriga (HWTS-3006C, HWTS-3006B)) firmalt Jiangsu Macro & Micro-Test Med-Tech Co., Ltd. Lisage talluse sadele 200 μL füsioloogilist lahust. Edasised sammud peaksid järgima ekstraheerimise juhiseid ja soovitatav elueerimismaht on100 μL.
Variant 2.
Soovitatav ekstraheerimisreagent: Tiangen Biotech (Beijing) Co., Ltd. nukleiinhappe ekstraheerimis- või puhastusreagent (YDP302). Ekstraheerimist tuleks alustada rangelt vastavalt kasutusjuhendi 2. sammule (lisage talluse saendile 200 μL puhvrit GA ja loksutage, kuni tallus on täielikult suspendeerunud). Elueerimiseks kasutage RNaasi/DNaasi-vaba vett ja soovitatav elueerimismaht on 100 μL.
Variant 3.
Soovitatav ekstraheerimisreagent: makro- ja mikrotesti proovi vabastamise reagent. Rögaproovi tuleb pesta, lisades ülalmainitud töödeldud talluse saendile 1 ml füsioloogilist lahust, tsentrifuugida kiirusel 13000 p/min 5 minutit ja supernatant ära visata (säilitada 10–20 µl supernatanti). Puhaste kolooniate ja rektaaltampoonide saamiseks lisada 50 µl proovi vabastamise reagenti otse ülalmainitud töödeldud talluse saendile ja järgnevad etapid tuleks ekstraheerida vastavalt kasutusjuhendile.
